个中252篇用了小鼠作为实验动物。研究被应用的转基因自闭症猴。

当提到鼠的时刻,你脑海里之第一印象是什么?

公海赌船网址 1研讨中运用的转基因自闭症猴。仇子龙供图

或许是脏,毕竟鼠类可以流传鼠疫、流行性出血热等毛病;可能是“硕鼠硕鼠,莫食我黍”
,因为鼠类是生机勃勃强、食物来极其广泛的啮齿动物;当然为恐怕是受热爱之卡通形象:迪士尼的米老鼠和《猫和老鼠》中之杰瑞。

猴年将至,一项由华夏科学家成功的“猴子研究”登上了国际特级学术期刊。与2014年中大关怀之基因敲除猴成果不同,在及时首1月26日见报于《自然》(Nature)的舆论被,科学家在食蟹猴中转入了人源基因MeCP2(全称是methyl-CpG
binding protein
2,即第二独跟甲基化DNA结合的蛋白质),针对的是同一栽复杂的神经系统疾病——自闭症谱系障碍。

可是,对于科研狗来说,小鼠却是他们将研究、发文章最忠诚的同伙。曾经来研究团体自由选取了276首学术论文,其中252首用了小鼠作为实验动物,小鼠真可谓是妥善坐模式动物之首先将椅子。

自闭症,也让孤独症,患者会展现有社交障碍、重复刻板行为、语言发育迟滞等情景,全世界有成千上万幼童及家庭被影响。目前以来,自闭症仍是平种神经基础还非常不明白的症候群。对于研究自闭症等神经系统疾病的话,一十分挑战是缺少理想的动物模型,新上之这项工作首先软构建起了相同种非人灵长类动物模型,将为自闭症提供一个与人类更为接近的平台,将人们对自闭症的认识及干预能力大大推动同步。

在研究细胞周期与长过程的动物模型中,果蝇、线虫和斑马鱼立下了汗马功劳,但以涉哺乳动物的免疫、内分泌、神经、心血管、骨骼及其他复杂的生理系统功能时,小鼠(Mus
musculus
)可以视作再美的动物模型实验材料。

这项工作的主要得人是中国科学院神经科学研究所之仇子龙研究员。在新浪微博自称“求导”的仇子龙或许是境内开自闭症基础研究的科学家被尽热情科学传播之。自2009年回国任课题组长由,他在科研工作的还要,在不利松鼠会的群博写过关于自闭症研究历史的长文《自闭症的浮游生物化学》,通过“果壳时间”“菠萝科学奖”“科幻星云奖”等各种活动频繁向公众介绍什么是自闭症、自闭症的遗传因素与他跟同事所尝试建立的又自闭症动物模型。

小鼠 Mus musculus

公海赌船网址 2仇子龙研究员在实验室。仇子龙供图

作为研究对象的前生今生

本次工作最终被收后,“求导”在微信吐槽,这个工作“做了五年半,投稿两年半,被《自然》拒过简单不行后死里逃生,修了六轱辘”,如此窘迫的工程如在高产的神经所里打破了多桩记录,比如耗时最为丰富、参与人最为多等。别的不说,为了说明转入的突变基因是否发或遗传,他们径直顶交第一代转基因猴生下了次替小猴子并拓展解析,耗时的丰富可想而知。有参与课题的生说,这是一个励志经典。

对小鼠的钻研而追溯到1902年了,哈佛大学的William
Castle在孟德尔遗传学研究之影响下,率先开始小鼠的遗传学研究,他对小鼠的遗传和基因转进行了系统分析,成功塑造了最早的可用于生物研究的小鼠品系。1929年,Jackson实验室开始非盈利性地啊美国的科研实验室提供稳定的小鼠。随后,由于小鼠价格低廉,便于操作,繁殖快速的特色,针对小鼠的克隆、基因修饰等基因工程措施发展到了一个初的冲天。

转基因自闭症猴子,有啊特别?

果壳网科学人:为什么说对自闭症的研讨,灵长类动物模型比过去之所以大鼠、小鼠做的动物模型更为重要?

仇子龙:用大鼠小鼠其实呢堪效仿一部分自闭症的表型,但咱知道,鼠的大脑还是同人类的大脑相差太远,无论是尺寸要组织,比如鼠脑就没人类大脑那样的沟回和脑区。用小鼠可以学一些基本的情怀(例如恐惧记忆、空间上等),但对此复杂的交际行为,用小鼠实验模拟出之结果就非那么相信了。实际上,要为此小鼠模型模拟神经系统疾病都是生紧的,不光自闭症,所有的大脑疾病,老年痴呆症也好、帕金森症也好、其他退行性疾病也好,都面临这个题材。像于人类里观察到之大脑神经元死亡现象,在小鼠里还没。而灵长类动物模型得起的结果相比小鼠模型就于前头推进了扳平死步。

果壳网科学人:用小鼠模型的自闭症研究相对比多,发展了部分作为套实验的检测方法,但对新的灵长类模型,行为套实验是什么统筹的?

仇子龙:这是一个核心之困难。对于猴子来说,什么是近似自闭症的行为,之前完全没定义,这点是咱逐渐寻找出的。为是我们探寻了累累六七十年代的有关猴子行为套的文献。

 

率先是检测自发的重复性刻板行为,也即是咱们文章中之第一单表现套结果,指的是猕猴自己会于笼子里转。然后,我们测试了猴子的担忧行为,这为是打灵长类行为模拟的文献中借鉴来的。当人走上前笼子时,猴子会叫,反映其害怕的心态,而转基因猴的叫声会比较一般的猴还响。

好端端猴子行为。视频提供:仇子龙

自闭症猴子行为。视频提供:仇子龙

连接下是交际行为,这在原先定义得生少,我们于当下方面和中科院昆明动物所的胡新天先生合作。他们直白以研猕猴的所作所为,2011年在PNAS上载了平等篇稿子,报道了小猴子如果从小便和妈妈分开,成年后的情怀会受到震慑,他们据此到的剖析就是是猴群中之互相行为。

马上看那么篇文章后,我们快问他怎么分析。根据他的建议,我们解析了猴群被猴子坐在协同(也吃“并盖”)的彼此行为。因为猴子中间深少出口音交流——即使有,我们也任不明白;而它为在联合,是平种植于突出的周旋行为的象征,也惠及观察,可以作为行为套实验的一个专业。我们在一连一个多星期的岁月外,每天挑一个原则性的日,将猕猴等从在笼换到观察笼进行观察。这个实验我们召开得异常仔细,有不同时间的检测(即猴子一样年度、两载、三载经常),也生差之映衬(即熟悉的猴子之间、以前非认的猴之间等),从而确信MECP2转基因猴确实是来应酬行为之酷。

猴子的一枝独秀社交行为:并坐。视频提供:仇子龙

果壳网科学人:有怎么样表现是MECP2转基因猴和正规猴之间区别不显的啊?

仇子龙:我们发现,在大概的体会行为达到,MECP2转基因猴是从未有过问题的,比如简单的搜索食物。

可是,在千头万绪的认知行为达到,比如根据两边特定的样来选择啊一方面有食物,就涌出了一个有意思的结果。这个读书任务自我很为难,对于野生型的猴子来说,我们的试验被呢不过发现了同仅仅猴子可以学会。不过,没学会为未尝涉及,因为擅自选的语也发出50%之几乎引领摘对。可是咱们发现,这个试验被的老三只是转基因猴不管学没学会、不管生没有发食物的褒奖,在测试时连“固执地”选某一边。也就是说,我们当体会行为被也意识了MECP2转基因猴发生接近刻板的行。

公海赌船网址 3转基因自闭症猴。仇子龙供图

果壳网科学人:目前曾了解自闭症谱系障碍以及诸多基因是息息相关的,您为什么会择MeCP2这个基因也?

仇子龙:接近百种基因会促成自闭症,有的是因为突变,有的是因为倍增。科学家在五六年前发现,MeCP2这个基因在拷贝数增加后会见招致人口的自闭症,外显率非常强,男孩带倍增的MeCP2百分之百碰头出现自闭症,所以MeCP2是一个相关性很强之自闭症基因。但万一问问有自闭症病例中来些许是以MeCP2这个基因突变,其实是颇少之,在一百只病人中,可能一味发几乎独病例,比例不会见过3%。

值得注意的凡,这百来只基因里并无是未曾沟通的。就如我们多年来察觉,MeCP2
可以影响其他自闭症基因,比如PTEN基因等。这便证实,我们不一定需要各个研究就一百种植基因,可能就待关注中几种不畏执行了。所以我们认为,虽然由于MeCP2一种植基因引起的自闭症病例非常少,但它于自闭症相关的基因网络里,有着至关重要的意思。

以及任何所有胎生哺乳动物相同,小鼠和人类还具备一致的为主躯体及器官组织。小鼠拥有超过90%暨人类一样之基因,以及99%底人类同源基因(指从进化角度看,具有同等祖先或者来之基因)。除了特别的裸鼠,小鼠全身都让通货膨胀。常见的毛色除了白色,还有黑色、棕色
、灰色等。老鼠的醒目外观特点还连:耸立的圆弧耳朵和小白鼠鲜红的双眼。

一律仅仅奇怪牺牲的猴子,回答了审稿人之奸诈问题

果壳网科学人:在点滴涂鸦吃拒绝和六轮修改的历程遭到,这个工作出矣什么提升?

仇子龙:第一坏拒稿,主要缘由是平等开始遇到的编写觉得咱们做的转基因猴不顶重要,于是很快拒绝稿了。

一个星期后,《自然》分管神经系统疾病的编回来,觉得我们的办事挺有意义,又拿文章“捞”了归来,重新被了咱会。但这历程让我们发现及,尽管做转基因猴本身很无轻,但还不够,还必须配合还详细的辨析。于是我们花费了一半年的时日,补充了本无底张罗行为实验,在2013年年底次破投了回到。新的审稿人意见认为,我们得举行更多之一言一行套实验,回答一些题目。但次不好受驳回,最重点的因由是咱没有能回应他们最感谢兴趣的问题,也不怕是转入的外源基因在染色体里的布。当时从技术上我们挺为难去分析,没有答案。

直到2014岁末,我们赢得了次代表转基因猴,又经外技术可以分析转基因的定点。看到我们的拓展后,编辑要求我们通信描述一下方可做哪实验,编委会据此答应让咱老罕见的次不良修改后投稿的机遇。所以于2015年新年开班,我们同时消费半年日组织了新的尝试。没悟出编还是未称心,根据编意见,我们补充了为此刚刚断奶的小猴子所举行的一言一行实验,描述了咱着眼到之结果——刚刚断奶的小猴子就发好显眼的张罗行为表现,而转基因的猴从小就是不喜欢和别的小猴子坐于共。拿到这结果吧于咱们老震惊:第二代转基因猴携带的外源基因只有首先替的一半不顶,但纵然如此都发坏强之表型。

果壳网科学人:这项工作产生丰富时停滞不前的流也?

仇子龙:我们获得转基因猴之后,学术界质疑很多,主要是关于什么验证观察到之一言一行套表现是由于转入的基因所招的。对于一个严肃的学问文章,科学家会关心这些作为套特色是否大特殊、和人之自闭症有多诸如、是否会面遗传到晚。如果是小鼠,可以解剖检测,但于在的猴子不可知这样做,那就算回应不了转基因猴的大脑是否确实特异性地发表了转入的基因。直到2014年底,有一致独自转基因猴因为人因竟然身故,我们赶紧进行解剖,才应了审稿人那些刁钻的题材。要感谢那只是为科学事业意外牺牲之猴。

果壳网科学人:最老的下压力来源于哪方?

仇子龙:技术生成大快。2009年左右,利用缓慢病毒转入外源基因的技能转换得成熟,我们开筹划转基因猴,这在就还是颇为难之政工。2012年TALEN技术下,人们得以开基因敲除的动物;2013年,CRISPR技术下,可以再次敏捷地举行基因敲除动物。很快,至少基因敲除撤换得仿佛不那么难了。

为此时推至2014年时,我们尽技术上的先进性就从未有过了。但新技巧于咱们研究的题材的话并无那么有因此,因为MeCP2基因是倍增后致严重的自闭症,做基因敲除并无能够促成用猴子模拟自闭症的目的。这吃咱立马高居同一栽不知哪改善为不知怎样包装的模糊状态,甚至对用缓慢病毒做的转基因猴究竟会由呀打算产生了深十分之问号。等及我们坚持做了第二替转基因猴的解析,其实是得在“没关系,不管怎样都努力了,该做的已经还开了,做事在口,成事在天”的心怀。

果壳网科学人:这个工作花费了这么丰富的时,对切实的履行人耶产生未一致的求?

仇子龙:神经所的转基因平台承担了初的转基因动物制备工作,接下的辨析工作由我们课题组完成。但是,行为套分析不仅工作量非常巨大,而且结果未知,无法预知是否会发生阳性的结果,更无法预知是工作啊时才会载。让生来做风险性这么大的行事就是非绝现实。

立即首文章的一路第一作者李霄是几年前作为技术员在我们课题组的如出一辙称硕士生,是只干活很细的男生,受过深好之基础训练。我报告他,这个工作挺重点,但是要是冒用很可怜之高风险,无法考虑投入起。他最后独立完成了行套的富有分析。一个主要之做事怎么来让青年科研人员产生动力来负责,这吗是一个挑战。

公海赌船网址 4李霄(左)和仇子龙。仇子龙供图

果壳网科学人:对于自闭症的研讨,得到动物模型只是一个开始,你们眼前在举行与接下来会召开什么?

仇子龙:如您所说,这只是一个方始。动物模型要力所能及就此来干活,否则即从不意义了。我们本于召开的首先宗事是管这种带有人类基因突变的猴运及了神经所的脑成像平台,做磁共振脑成像,分析猴子大脑和自闭症患者的大脑有啊共同点。之前有文献显示,人类自闭症的有的重刻板行为、社交障碍和人数的少数脑区有相关性,但那些研究并不知道相关的遗传因素,所分析的好多独自闭症病例都未掌握是跟什么基因突变有关的。而我们本有一个尽人皆知的MeCP2基因突变,并且动物呢显现来了刻板行为以及社交障碍,所以接下要分析,在转基因猴中找到的脑区异常是否与文献里报道的同样。这里为尽管反映出了为此猴作为动物模型的优势,如果是小鼠的语虽净无法与脑子做如此的可比。初步取得的结果十分令人振奋。

连通下有几项重要的事体可以举行,包括各种干预,药物干预、物理干预、基因疗法之类。药物来说十分为难,因为今天几从不针对性自闭症的药物。因而我个人认为,可以考虑怎么打来自上改变。我们清楚转基因猴的自闭症是基因倍增造成的,那以咱们的动物模型上便好品尝一些少还没法在口身上用之计,做片基因的编写。

多少白鼠顺滑的毛皮、澄澈之吉眼睛都是判健康状态的表明

科学家需要大的、有公信力的散播平台

果壳网科学人:对于民众来说,听到一个及疾病相关的基本功研究得到关键进展时,最想的是看及之含义。但事实上,这项工作如果到看使用还有特别要命之距离?

仇子龙:我们以为是工作之临床意义很非常,但无可知说出矣是动物模型马上就是好为此来罗药物。药物筛选是格外缓慢的。我们可以就此这个模型去问,人类那么复杂的大脑究竟什么地方产生了问题。并且,一旦有了问题,我们可能得不用药——因为对于神经系统来说,药物未必会一直打及意向,而是可以为此有非创伤的不二法门,比如脑电刺激或经颅磁刺激等干预方法。一旦在猴子身上发现了行之干预方法,很爱接通至人类。这是为何猴子模型那么被重视的原故。

果壳网科学人:仇先生是特地热情科学传播的科学家,无论是当风的线下讲座或网上的争辩,都开过不少自闭症的科普,那么遇到了怎么比较普遍的对准自闭症的误会?

仇子龙:普遍的误会有某些接触。最深之误解是免晓得自闭症的缘起,有人错误地认为自闭症是为妈妈怀孕时吃了呀,或是因为打疫苗。我若强调,自闭症肯定是基因转引起的,但基因的要素非常复杂,有的时候是先天突变,有的时候是隐藏突变,有的上是体细胞的嵌合,等等。测量基因突变的手段目前呢于飞速发展。可以一定,自闭症绝对不是打疫苗引起的,也未是后天之某些免疫缺陷引起的。但要是专注,某些自闭症孩子的确会出现异常过敏原,但无是说只有因为过敏就有了自闭症。

单,好多自闭症孩子的双亲在带来孩子进行好治疗时,容易碰到非法的机关被你灌输一些莫名其妙的眼光,比如餐饮疗法、针灸治疗等无主流的所谓好疗法。本来家长已发出很可怜压力,如果还于他们那么基本上了未经确证的、有好老或是骗钱之法门,造成的影响颇深。

果壳网科学人:这也认证,真正以开自闭症研究之科学家再次有必不可少多开科普的劳作吧?

仇子龙:其实科学家做是传播最根本之是索要一个平台,尤其是亟需一个高于的、公信力高、有学辨别能力的媒体平台和传播渠道来发声,比如果壳网。有些人也许会见生出疑难,你们科学家怎么不失举行传播?从科学家的角度来说,其实会遇见重重去开是传播之特邀,但如果把科学家放到没有公信力的传媒平台,你说的言辞向无人深信不疑,效果适得其反。这是待科学家和传颂平台相互配合的事情。

公海赌船网址 52010年,科学家演讲平台“果壳时间”(后来之“未来光锥”)为仇子龙拍摄的影。仇子龙供图

小鼠和人类疾病

比科幻更科幻

果壳网科学人:仇先生去年与了星云奖开幕式,当时啊做了关于自闭症的告知。之后我瞅小姬发了一致长条微博说,“听罢科学家的演说发现,科幻里之物都休是科幻,实验室里的研究于科幻还要多”。站于召开科研的角度,您看如何现在放起科幻的作业,将来也许成为实际?

仇子龙:其中某是毛病的基因测序。自闭症也好,其他精神疾病也好,或者其它组成部分遗传疾病,通过基因组测序,可以快找到病因。这当当下早就起很快的前进,并且按照以陆续发展。对于复杂的精神疾病,接下去几年见面有的一个不行要命转移是,终于得找到遗传上的病倒因素。找到了一百个及自闭症有关的基因,那对于自闭症的病因素吧不是答案。目前我们与上海精神卫生中心合作,在中原之自闭症患者中找致病因素,已经找到了无数只病例,期待收获一个答案。

果壳网科学人:作为一个科幻爱好者,有没发同科幻作家进行“碰撞”,比如提供一些想方设法被科幻作家,或者从科幻作家的作品被获做科研的灵感?

仇子龙:我本也想了我们的故事可以为科幻作家提供有材料,后来发觉及时是独十分naive的想法,因为科幻作家的想象力非常丰富。比如自己及刘慈欣提到本人的一个想法,人之自闭症基因是匪是足以看成同一种植基因武器。大刘马上就说:我看罢千篇一律本书,就是跟你说之一致。哎呀,原来早就有人形容过啊!人的想象力真是无穷的。所以,基本上不用考虑于科幻作家提供什么材料。但是,经常的交流是不行好的。大刘后来十分喜爱同咱们科学家聊天,是以他好从中领略真正的不易开展到了呀程度。

除此以外一个例证,是本人与杭州的科幻作家赵海虹先生的交流。她被我看了她底一模一样客稿子,写到一个关于嗅觉的故事,让我望中的是内容针对匪针对。我看看里边来涉嫌嗅叶,告诉她哺乳类的大脑里是从未嗅叶的,帮其转了片这样的不易描述。类似这样的交流为自家当很有意思,我吧信任科学家和科幻作家之间会发生成千上万交流,科学与科幻很特别程度达确实是对称的,期待与科幻作家有还多的交流。(编辑:odette)

好在为与人类基因结构的万丈一般,科研中使小鼠进行个别类人类疾病之钻研。一好像是于小鼠自身发育及衰落过程即见面博得疾病,如:动脉粥样硬化、高血压、糖尿病和青光眼等。另一样近乎是透过操纵环境因素或改小鼠的基因组成诱导获得的病症,如哮喘与阿兹海默症等。

参考文献

  1. Zhen Liu, Xiao Li, Jun-Tao Zhang, et al., Autism-like behaviours
    and germline transmission in transgenic monkeys overexpressing
    MeCP2. Nature (2016) doi:10.1038/nature16533

水迷宫实验(Morris water
maze)
凡是经过小鼠等动物之作为判断其的智力情况跟咀嚼能力的试行。小鼠在试行中被迫通过游泳,在就学的长河遭到搜寻藏身于水中的阳台,逃离水域。不同的指标为用来衡量鼠类的上空感知能力及学习能力,比如达指定平台所用的年月、到达平台前游泳的总路程,又或许在产生提示的景下,小鼠表现的升官水平等等。

以历届迷宫游泳之小鼠

研发现,不同性别的小鼠也有深挺距离,在雌雄同居的小鼠群体被,雄鼠拥有无可争辩优势,因此普通以性别分开饲养。即便如此,成年雄性小鼠在同笼饲养过程中为会见油然而生争斗。“理发师”是雄性小鼠群居时的有趣现象,指的是于活斗争占上风的雄性小鼠会拔去另外小鼠的胡子并保留自己之胡须的行为。

希冀右为给“理发师”小鼠拔取胡须和发的小鼠,图左为对照小鼠

小鼠用于的生物医学研究的原由,不仅在于其体型小、每窝产仔数目多带的容易获得性和性成熟早、妊娠期短带来的尝试周期短的便利性,更在其给充分研讨之解剖和生理特点,还在经了连年的人造品系构建和罗小鼠拥有丰富的近交品系(多世代近亲繁殖产生的品系)、杂交品系和突变品系。

由于多毛色宠物鼠群和青紫蓝色鼠群杂交培育的129小鼠的逐条亚系

转基因小鼠

除去“原装”的小鼠可以用来试验,转基因小鼠也深受广大用于试验中。一种植是以针对小鼠胚胎细胞的细胞核进行显微注射,将外来基因插入小鼠的基因组中贯彻基因的抒发。另一样种植是构建平种载体工具导入小鼠的体内,载体及小鼠胚胎干细胞受到基因具有同源性,因此在平等种名叫“同源重组酶”进行整合,同源基因在重组的历程被好完成“精准修改”或者敲除

显微注射和基因编辑方法得到转基因小鼠

左为头发生长基因被敲除的小鼠,右为正常小鼠

在决定的基因无法透过明确改观外观特点时,可以经在转基因过程中同并入转“报告基因”作为转基因实验是否中标的“指示灯”,荧光蛋白基因是报告基因中直观、有效之一致种。

导入了绿色荧光蛋白GFP的转基因小鼠,GFP在蓝光激发下上绿色,图中左右少光都为转基因小鼠,居中为健康小鼠

起了“转基因小鼠”这管利器,把带有功能性的人类基因等转入小鼠体内,可以造就有人源化小鼠用作人类疾病的代模型。人类基因在小鼠的体内可以正常的就的转录、翻译并表达蛋白质,但是相应的小鼠同源蛋白在小鼠细胞与团内且不表达。

人源化小鼠的基本原理在于,将人类的一个基因部分还是任何调换同源小鼠基因

匪人体实验不可避免的一个题材,就是动物模型的研讨结论是否直接行使至人类研究着。动物实验的第一目标,并无是为快速取得颠扑不脱之数据以及原理,而是只要一步步地测试和研讨好用来人类的试验艺术,或者至少有效到值得用于人类实验的办法。

小鼠由于在基因结构以及表述功能及跟人类有多之相似性,所以她至今还是一个好的备动物模型。相信通过一致文山会海模式动物之牵线,大家对实验动物在生物学研究着的位置应该知道了众。根据实验目的选择最为相宜的试验材料,既非“杀鸡用牛刀”,也无“蚍蜉撼大树”。

话外音:值得告慰的凡,动物福利在国内外越来越受到关注。动物福利是据吃动物满足无限中心的生存需要,保证动物健康、感觉舒适、营养充分、安全、能够轻易表达天性并且不给痛苦、恐惧和压力威胁。动物福利不仅是对准科学实验的动物,更是用人道主义的看法对待身边有活泼的生。

参考文献:

Beck, Jon A., et al. “Genealogies of mouse inbred strains.”Nature
genetics
24.1 (2000): 23-25.

Chatterjee, T. K. “Handbook of laboratory Mice and Rats.”Department of
Pharmaceutical Technology, Jadavpur University
(2003): 157.

Morse, H. C.Building a better mouse: One hundred years of genetics and
biology
. Academic Press: Waltham, MA, USA, 2007.

Steensma, David P., Robert A. Kyle, and Marc A. Shampo. “Abbie Lathrop,
the “mouse woman of Granby”: rodent fancier and accidental genetics
pioneer.”Mayo Clinic Proceedings. Vol. 85. No. 11. Mayo Foundation,
2010.


本文为小编特邀的大面积作者痕量(新加坡国立大学医学院当念博士)的原创文章,希望你们好!

相关文章